ELISA-testet upptäcker många sjukdomar, varför det har funnits bred tillämpning inom medicin och mer. ELISA-testet är dock mest känt för sin diagnos av Lyme-sjukdomen. Vad är ELISA-testet? Hur tolkar man resultaten? Vad kostar testet?
Innehållsförteckning:
- ELISA-test - vad upptäcker det? Tillämpning av ELISA-testet
- ELISA-test - vad är testet?
- ELISA-test och Lyme-sjukdom - när ska man utföra?
- ELISA-test - pris. Hur mycket kostar ett ELISA-test?
- ELISA-test - resultat. Kan de vara falska positiva?
- ELISA-test - resultat. Kan de vara falskt negativa?
ELISA-testet, dvs den enzymbundna immunosorbentanalysen, är en vanligt använd laboratoriemetod som tjänar bland annat för kvantitativ detektion av antikroppar i blodet.
Av denna anledning har ELISA-testet använts vid diagnos av bakteriesjukdomar, såsom Lyme borrelios.
Fördelen med ELISA-metoden är dess enkelhet och möjligheten till snabb implementering såväl som hög känslighet. ELISA-metoden utförs med hjälp av speciella plastplattor med brunnar fyllda med t.ex. Borrelia-proteiner (antigener) och specifika monoklonala antikroppar, som är utformade för att detektera antikroppar i patientens prov.
ELISA-test - vad upptäcker det? Tillämpning av ELISA-testet
ELISA-metodens höga känslighet och enkelhet gjorde det tillämpligt vid diagnos av många sjukdomar, men det är mest känt som den diagnostiska metoden för Lyme-sjukdomen.
Vid diagnos av Lyme borrelios, den så kallade indirekt ELISA, som gör det möjligt att detektera specifik IgM eller IgG i det testade materialet. På samma sätt kan antikroppar detekteras för diagnos:
- virusinfektioner: herpesvirus (herpes, herpes zoster, Epstein-Barr, cytomegalovirus), HIV, hepatitvirus (HBV och HCV)
- protozoinfektioner: toxoplasmos, giardiasis
- autoimmuna sjukdomar: celiaki (anti-tTG eller anti-DPG antikroppar), Hashimotos sjukdom (anti-TG och anti-TPO antikroppar), inflammatoriska tarmsjukdomar (anti-ASCA och anti-ANCA antikroppar)
- parasitiska sjukdomar och allergier där specifika IgE-antikroppar detekteras. Deras ökade nivå kan indikera förekomsten av allergier, t.ex. mot pollen och mat, eller parasitisk invasion (beväpnad bandmask, mänsklig rundmask)
Det finns också modifieringar av ELISA-metoden (den så kallade sandwich-ELISA), som gör det möjligt att detektera ett prov av andra proteiner än antikroppar. Då är testets syfte att upptäcka i det biologiska materialet:
- fragment av virus eller bakterier, oftast är de antigener som är karakteristiska för en given patogen
- serumhormoner, t ex östrogen, prolaktin, TSH, fT4, kortisol
- enzymer, t.ex. kalprotektin, bukspottkörtel elastas, alkaliskt fosfatas
- tumörmarkörer, t.ex. CA-125
- förekomsten av läkemedel i serumet
Denna metod är också användbar inom livsmedelsindustrin, där den kan upptäcka spårmängder av allergener (t.ex. mjölk, jordnötter), GMO eller toxiner i livsmedel.
ELISA-test - vad handlar det om?
Diagnosen av till exempel Lyme borrelios med ELISA-metoden består i att detektera immunproteiner i biologiskt material - antikroppar som uppstår under svaret mot Borrelia-antigener.
Antikropparna testas i två klasser, IgM och IgG. IgM är de första antikropparna som dyker upp i kroppen när de kommer i kontakt med bakterier och de minskar med tiden.
Deras plats tas av mer ihållande IgG-antikroppar som kan stanna i kroppen i flera dussin år.
På detta sätt testas närvaron av bakterier i kroppen indirekt genom att detektera antikroppar specifikt riktade mot Borrelia spirocheter.
Antikroppar vid olika infektionsstadier kan riktas mot en mängd olika Borrelia-proteiner. Till exempel, i ett tidigt skede är det p41-proteinet.
I de senare stadierna börjar fler och fler proteiner dyka upp, såsom p21, p30, p39, p43. Detta är anledningen till att Lyme-sjukdomsdiagnosen är extremt svår.
Valet av bakterieproteiner är extremt viktigt för att testet ska ha ett högt diagnostiskt värde. Därför bör rutinmässigt vid diagnos av Lyme-sjukdom användas ELISA-test II-generationen eller III-generationen där proteinsatser väljs för att uppnå det mest tillförlitliga resultatet.
ELISA-test och Lyme-sjukdomen. När ska man göra?
Lyme borrelios är en bakteriell sjukdom som orsakas av bakterien Borrelia burgdorferi och dess många sorter.
Diagnosen av sjukdomen är inte enkel på grund av komplexiteten i immunsvaret mot Borrelia och laboratorieförfarandets brister.
Den vanligaste laboratoriemetoden är den mycket känsliga ELISA-metoden, som detekterar specifika antikroppar mot bakterieproteiner.
Vid diagnosen av Lyme-sjukdomen används den indirekta ELISA-metoden i vilken följande steg skiljs:
- inkubation av brunnarna på plattan med material som samlats in från patienten, t.ex. serum. Om det finns antikroppar mot Borrelia i det testade materialet, binder de till proteiner längst ner i reaktionsbrunnen
- sedan sköljs överskottet av serum ut med en speciell tvättvätska (buffert) och sk konjugat, dvs en antikropp kopplad till ett enzym som binder till tidigare kopplade antikroppar i reaktionsbrunnarna
- sedan tillsätts substratet för konjugatet och en färgreaktion inträffar (positivt resultat) eller ingen färgreaktion (negativt resultat)
- det sista steget är läsarens läsning (spektrofotometer) av koncentrationen av antikroppar mot Borrelia i patientens serum
ELISA-testet för Lyme-sjukdomen utförs från blod, och i fallet med neurologiska symtom (neuroborrelios), också från cerebrospinalvätskan.
Synovialvätskan bör inte testas eftersom det är hög sannolikhet för falskt positiva resultat.
Grunden för diagnosen av sjukdomen är kliniska symtom som indikerar det, bekräftat av resultaten från laboratorietester.
Tillägget av ett laboratorietestresultat utan symtom tillåter inte diagnosen Lyme-sjukdom, eftersom det har visat sig att antikroppar mot Borrelia också detekteras hos friska människor.
Serologisk diagnos av Lyme borrelios börjar med ett semikvantitativt ELISA-screeningtest. Om resultatet är negativt betyder det att inga Borrelia spirocheter har upptäckts eller att resultatet är falskt negativt.
Om resultatet är positivt eller svagt positivt (tvetydigt) bör en bekräftande Western blot-testning, som kännetecknas av hög specificitet, utföras.
Detta för att bekräfta att ELISA-resultaten är "sanna". Under diagnostik kan du inte hoppa över något av ovanstående steg och till exempel utföra diagnostik med Western blot-metoden omedelbart eller göra en diagnos baserad på ett positivt ELISA-resultat ensam.
I Polen slutar diagnosen av Lyme-sjukdomen ofta vid det första screeningstadiet, vilket orsakar en felaktig tolkning av positiva eller svagt positiva resultat.
Rekommenderad artikel:
Lymfocyttransformationstest (LTT) Bra att vetaELISA-test - pris. Hur mycket kostar ett ELISA-test?
Testet kostar cirka 60 PLN och görs direkt. Du kan dock vänta ungefär tre månader på resultatet av hänvisningen.
ELISA-test - resultat. Kan de vara falska positiva?
Falskt positiva resultat är resultatet av korsreaktivitet av IgM-antikroppar med andra proteiner. Antikroppar som produceras av kroppen kan "felaktigt" känna igen ett antigen från andra mikroorganismer som Borrelia-antigenet.
De vanligaste "misstagen" förekommer hos personer som är smittade med treponema pallidum, herpesvirus och hos personer med systemisk lupus erythematosus och andra reumatiska sjukdomar.
ELISA-test - resultat. Kan de vara falskt negativa?
Falskt negativa resultat kan uppträda i ett tidigt skede av infektionen, i vilket fall testet bör upprepas efter cirka 3-4 veckor. Det här kallas serologiskt fönster, det vill säga den första infektionsperioden där kroppen ännu inte har "lyckats" producera specifika antikroppar.
Detsamma gäller för personer med immunbrist som inte producerar tillräckligt med antikroppar.
Ett stort problem, särskilt vid mycket intensiva infektioner, är utseendet på den så kallade immunkomplex som består av Borrelia-antigener och specifika antikroppar för dem.
Som ett resultat blir antikropparna "osynliga" för vanligt använda metoder såsom ELISA, och även om de finns i det testade materialet kan de inte detekteras.
I sådana fall kan laboratoriet använda nedbrytning av immunkomplex. Denna behandling är utformad för att frigöra antikropparna. Denna metod används dock inte i stor utsträckning på grund av brist på standardisering i laboratorier.
Värt att vetaVarför är Lyme-sjukdomsdiagnos inte lätt?
Detta beror på immunsvarets komplexitet mot Borrelia och begränsningarna i laboratoriemetoder. Mångfalden av sorter och uppkomsten av nya som orsakar infektioner, särskilt på den europeiska kontinenten, underlättar inte utvecklingen av effektiva diagnostiska metoder.
Fler sorter har nyligen dykt upp i Europa, såsom Borrelia bissetii, Borrelia valaisiana och Borrelia spielmanii. Dessutom kan Borrelia spirochetes i kroppen förvandlas till cystor eller stanna på platser i kroppen oåtkomliga för celler i immunsystemet.
Att vara "osynlig" för immunsystemet. Dessutom har det visats att vävnaderna kan innehålla fragment av bakterier som har starkt proinflammatoriska egenskaper. De tros vara ansvariga för de kroniska symtomen vid Lyme-sjukdomen, trots negativa laboratorietestresultat.
Litteratur
1. Witecka-Knysz E. et al. Lyme-sjukdomen: varför är diagnosen så svår? Laboratoriediagnostiker april 2007.
2. Moore A. et al. Aktuella riktlinjer, vanliga kliniska fallgropar och framtida anvisningar för laboratoriediagnos av borrelia, USA. Emerg Infect Dis. 2016 jul; 22 (7).
3. Laboratoriediagnostik av fästingburna sjukdomar. Arbetsgruppens rekommendationer: National Chamber of Laboratory Diagnosticians, National Institute of Public Health-National Institute of Hygiene, National Consultant in the field of infectious sjukdomar, Institutionen för infektionssjukdomar och neuroinfektioner, Medical University of Białystok, Polish Society of Virology, Warszawa 2014
4. Hosseini S. et al.: Enzymkopplad immunosorbentanalys (ELISA) Från A till Z. Springer 2017.
